细胞培养中出现沉淀?原因和解决方案都在这!

发表时间:2023-05-18 14:27
细胞培养中的沉淀情况:
如果排除了污染,细胞培养基中的浑浊通常被解释为金属、蛋白和其他培养基组分的沉淀。沉淀物可能损害细胞健康,因为他们通过螯合可移除养分和其他需要的组分,从而改变培养基的组成。沉淀物也是显微镜可见的,可能会干扰依赖成像的实验分析。
一、产生沉淀的可能原因
1、温度变化
在细胞培养中,温度是引起沉淀的主要因素之一。当遭遇温度的极端变化时,高分子量血浆蛋白会从溶液中析出;热失活和冻融循环能促进蛋白降解和沉淀;因为液体或重组成培养基在使用之间保持冷藏储存,盐可能沉淀,尤其是10x或其他浓缩的储存液。
2、失水诱导的浓度改变
如果培养基可能蒸发,培养基组分(包括盐) 的浓度将会增加,特别是培养基表面可能容易形成
晶体沉淀。
3、钙盐
制备无血清培养基时,组分添加的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反应产生CaSO4晶体。高压灭菌和pH值不稳定会加剧这一问题。
4、金属补充物
铜、铁和锌等金属离子是细胞生长所必需的,是无血清培养基的重要补充物。培养系统中其他血清组分的缺失可能导致这些金属沉淀,为细胞形成有毒的环境。在较高pH环境下(一般>8时),碳酸盐和氢氧根离子与铜离子、磷酸盐和氢氧根离子与铁离子、碳酸盐、磷酸盐和氢氧根离子与锌离子、氢氧根离子与镁离子易形成不溶性沉淀物;在氧化条件下,铜和锌更易于沉淀。
金属沉淀物颜色表:1.png
4、污染
培养物浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。

二、细胞培养沉淀的常见原因和解决方案

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