血清是否需要灭活？关于血清热灭活的争议

血清热灭活非必要

血清热灭活的步骤在1970年代就已建立，至今已成为很多实验室的常规血清前处理步骤；但许多先前认为必须热灭活的原因，却早已经不再成立。

血清热灭活的争议

至少70%的研究者对血清的灭活仅仅是因为遵照常规操作，或者说认为是理所当然的。常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间，而时间则从15分钟到60分钟不等，其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高，许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立，只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。

热敏补体与热灭活

热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质，但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。专业人士曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定，他们发现胎牛血清中含有的C1、C6仅达成年动物血清的1~3%，而其它补体成分仅有成年动物的5-50%，至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验，也在多个不同批次的胎牛血清中获得了相似的结果。即使是在未稀释的血清中，也未发现有明显的溶血现象。另外，多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程，也对热敏的补体有灭活的作用。

胚胎发育与热灭活

血清去除灭活步骤不影响牛胚胎的发育分化；有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4细胞对细胞粘附实验中，热灭活对胎牛血清的影响小于对小牛血清的影响。

细胞株生长与热灭活

热灭活对胎牛血清以及对其中不同细胞株生长能力是否有影响？通过比较11个不同细胞株，发现其中热灭活对6个细胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纤维细胞，MRC-5）的生长带来负面影响，三个细胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受热灭活的影响，而只有两个细胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid），在热灭活之后，细胞生长有轻微的改善。所以，在正常的操作下，热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。

沉淀与热灭活

在正常操作下，热灭活经常给血清产品带来负面的影响，对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生，而导致的沉淀又常常被认为是微生物的污染。注意到这个现象之后，为了验证污染的存在，或者促进沉淀的溶解，许多培养者往往将血清放置37℃温育。这却往往使情况变得更糟，血清中的蛋白进一步的析出，为了确信血清未被污染，进行的镜检、无菌培养试验和革兰氏染色试验，更是浪费了实验者大量的时间和精力。

结论

总之，多数细胞培养中血清的热灭活并不是必要的。很多场合下，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比率也是微不足道的。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染，从而给用户和供应商都带来不必要的麻烦。